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DuraScribe® T7 Transcription

　更新時(shí)間：2015-03-03　點(diǎn)擊量：1775

名稱： DuraScribe? T7 Transcription Kit

貨號(hào)： DS010910

單位： 10 Rxns

DuraScribe? T7 Transcription Kit
The DuraScribe? T7 Transcription Kit試劑盒是一個(gè)體外轉(zhuǎn)錄試劑盒產(chǎn)生稱為DuraScript? RNA的RNA，能夠*抵抗RNase A的降解.
The DuraScribe T7 Transcription Kit試劑盒含有DuraScribe T7 RNA聚合酶,該聚合酶是T7RNA聚合酶的Y639F突變體，能夠有效將2′-Fluorine-CTP (2′-F-dCTP), 2′-Fluorine-UTP (2′-F-dUTP), ATP 和GTP合成到RNA酶抗性的稱為DuraScript RNA的轉(zhuǎn)錄本中 (Figure 1). DuraScribe T7 RNA 聚合酶與野生型的T7 RNA聚合酶使用相同的T7啟動(dòng)子。
應(yīng)用
DuraScript RNA 被證實(shí)適用于RNA配體合成，核酶，RNA干擾(RNAi)和反義RNA等研究。
好處

  • DuraScript RNA能夠抵抗RNase A和DNase
  • 高產(chǎn)DuraScript RNA
  • T7 體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng). DuraScribe DuraScribe T7 RNA 聚合酶與野生型的T7 RNA聚合酶使用相同的T7啟動(dòng)子.
  • 是RNA配體研究的理想選擇. 有大量的RNA適配體研究引用DuraScribe Kit試劑盒
  • SELEX-兼容. DuraScript RNA 可用于SELEX選擇過(guò)程。
  • 制備長(zhǎng)的或短的DuraScript RNA. 帶有T7聚合酶啟動(dòng)子的雙鏈寡核苷酸，線性質(zhì)粒，PCR產(chǎn)物均可被轉(zhuǎn)錄.

Table 1.一個(gè)DuraScribe? Kit試劑盒反應(yīng)產(chǎn)生的DuraScript? RNA量。3-Kb 長(zhǎng)度的DNA模板被在不同位置打斷形成線性化，然后通過(guò)DuraScribe T7 Transcription Kit 反應(yīng)4小時(shí)。DuraScript RNA產(chǎn)物量以微克 (μg)和皮摩爾(pmol)顯示。


產(chǎn)生的DuraScript RNA的大小

DuraScript RNA的產(chǎn)量 (μg)

DuraScript RNA的產(chǎn)量(pmol)

2600 nts

100 ug

116 pmol

1400 nts

58ug

124 pmol

330 nts

18ug

164 pmol

88 nts

9ug

307 pmol

Figure 1
Figure 1
Figure 1. DuraScribe? T7 RNA聚合酶有效將2′-F-dCTP和2′-F-dUTP嵌入到全長(zhǎng)DuraScript? RNA。 2′-F-dC和2′-F-dU核苷2′-位置的氟能夠阻止RNase A的降解。

 

 

Figure 2Figure 2. DuraScribe? T7 轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的RNA產(chǎn)量. 標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)(4-6小時(shí))產(chǎn)生40-60 μg的1.4-kb長(zhǎng)度的DuraScript? RNA。

Figure 3
Figure 3. DuraScript? RNA抵抗RNase A的降解. 1.4- kb長(zhǎng)度的標(biāo)準(zhǔn)RNA轉(zhuǎn)錄本和1.4-kb長(zhǎng)度的 DuraScript RNA轉(zhuǎn)錄本加入1 U的高純度RNA酶A孵育30分鐘。標(biāo)準(zhǔn)的RNA轉(zhuǎn)錄本被*降解，而DuraScript RNA轉(zhuǎn)錄本仍然完整。Lane M, 分子標(biāo)記; lane 1, 1.4-kb 標(biāo)準(zhǔn)RNA轉(zhuǎn)錄本; lane 2,標(biāo)準(zhǔn)RNA被RNA酶處理后; lane 3, 1.4-kb DuraScript RNA; lane 4, DuraScript RNA 被RNase A處理后。

Figure 4
Figure 4. DuraScript? RNA*抵抗 "手指"核酸酶。使用無(wú)菌水和被受試者手指污染的水制備的1.4-kb的標(biāo)準(zhǔn)RNA轉(zhuǎn)錄本和1.4-kb的 DuraScript RNA 轉(zhuǎn)錄本。標(biāo)準(zhǔn)RNA被手指核酸酶廣泛降解，而DuraScript RNA保持完好。M, 分子標(biāo)尺; Lane 1, 標(biāo)準(zhǔn)RNA 轉(zhuǎn)錄本; Lane 2, 手指核酸酶污染后的標(biāo)準(zhǔn)RNA; Lane 3, DuraScript RNA; Lane 4, 手指核酸酶污染后的DuraScript RNA.

  Catalog No.Size
DuraScribe? T7 Transcription Kit
   DS010910 10 Reactions
   DS010925 25 Reactions
Contents: DuraScribe? T7 Enzyme Mix, RNase-Free DuraScribe? T7 10X Reaction Buffer, ATP, GTP, 2′-F-dCTP, 2′-F-dUTP, DNase I, DTT, Control Template DNA (linearized), Sterile Deionized Water.
DuraScribe? SP6 Transcription Kit
   DS041010 10 Reactions
Contents: DuraScribe? SP6 Enzyme Mix, DuraScribe? SP6 10X Reaction Buffer, ATP, GTP, 2′-F-dCTP, 2′-F-dUTP, DNase I, DTT, Control Template DNA (linearized), Sterile Deionized Water.

 

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